Taimsed ja patogeensed materjalid
Sorgo assotsiatsiooni kaardistamise populatsiooni, mida tuntakse sorgo konversioonipopulatsioonina (SCP), koostas dr Pat Brown Illinoisi ülikoolist (praegu UC Davis).Seda on varem kirjeldatud ja see on mitmekesiste joonte kogum, mis on muudetud fotoperioodi mittetundlikuks ja väiksemaks kasvuks, et hõlbustada taimede kasvu ja arengut USA keskkondades.Selles uuringus kasutati sellest populatsioonist 510 liini, kuigi halva idanemise ja muude kvaliteedikontrolli probleemide tõttu ei kasutatud kõiki jooni kõigi kolme tunnuse analüüsimisel.Lõppkokkuvõttes kasutati kitiini vastuse analüüsimiseks 345 rea andmeid, flg22 vastuse analüüsimiseks 472 liini ja TLS-i resistentsuse analüüsimiseks 456 rida.B. cookeitüvi LSLP18 saadi dr Burt Bluhmilt Arkansase ülikoolist.
MAMP vastuse mõõtmine
Selles uuringus kasutati kahte erinevat MAMP-i flg22 (genscripti kataloogi nr RP19986) ja kitiini.Sorgotaimi kasvatati kasvuhoones mullaga (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) täidetud tasapindadele asetatud vahetükkides.Taimi kasteti päev enne proovide võtmist, et vältida lehtede liigset niiskust kogumise päeval.
Liinid randomiseeriti ja logistilistel põhjustel istutati 60 liini kaupa.Iga liini jaoks istutati kolm "potti", kus igale reale oli kaks seemet.Järgmised partiid istutati niipea, kui eelmine partii oli töödeldud, kuni kogu populatsioon oli hinnatud.Mõlema MAMP-iga viidi läbi kaks katset, kusjuures genotüübid olid mõlemas katses uuesti randomiseeritud.
ROS-testid viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud.Lühidalt, iga liini jaoks istutati kuus seemet 3 erinevasse potti.Saadud seemikute hulgast valiti ühtluse alusel välja kolm.Seemikuid, mis nägid välja ebatavalised või olid enamikust oluliselt kõrgemad või lühemad, ei kasutatud.Kolme erineva 15-päevase sorgo taime 4. lehe kõige laiemast osast lõigati välja neli 3 mm läbimõõduga leheketast.Üks ketas lehe kohta kahelt taimelt ja kaks ketast ühelt taimelt, teisest kettast saab veekontroll (vt allpool).Kettad ujutati ükshaaval 50 µl H20-s mustal 96-süvendilisel plaadil, suleti alumiiniumist tihendiga, et vältida kokkupuudet valgusega, ja hoiti toatemperatuuril üleöö.Järgmisel hommikul valmistati reaktsioonilahus, kasutades 2 mg/ml kemoluminestsentssondi L-012 (Wako, kataloogi nr 120-04891), 2 mg/ml mädarõika peroksüdaasi (tüüp VI-A, Sigma-Aldrich, kataloogi nr P6782) ja 100 mg/ml Kitiini või 2 µM Flg22.50 µl seda reaktsioonilahust lisati neljast süvendist kolme.Neljas süvend oli näidiskontroll, kuhu lisati reaktsioonilahus, välja arvatud MAMP.Igale plaadile lisati ka neli tühja süvendit, mis sisaldasid ainult vett.
Pärast reaktsioonilahuse lisamist mõõdeti luminestsentsi SynergyTM 2 mitme tuvastamise mikroplaadilugejaga (BioTek) iga 2 minuti järel 1 tunni jooksul.Plaadilugeja teeb selle 1 tunni jooksul luminestsentsi mõõtmisi iga 2 minuti järel.Iga süvendi väärtuse saamiseks arvutati kõigi 31 näidu summa.Iga genotüübi MAMP-vastuse hinnanguline väärtus arvutati (kolme katsesüvendi keskmine luminestsentsi väärtus – näidissüvendi väärtus) – miinus keskmine tühja kaevu väärtus.Tühja süvendi väärtused olid pidevalt nullilähedased.
Lehtede kettadNicotiana benthamiana, lisati kvaliteedikontrolli eesmärgil igale 96-süvendilisele plaadile kontrollidena ka üks hästi reageeriv sorgo liin (SC0003) ja üks madala tundlikkusega sorgo liin (PI 6069).
B. cookeiinokulaadi ettevalmistamine ja inokuleerimine
B. cookeiinokulaat valmistati eelnevalt kirjeldatud viisil.Lühidalt, sorgo terad leotati kolm päeva vees, loputati, kanti 1-liitristesse koonilistesse kolbidesse ja autoklaaviti tund aega 15 psi ja 121 °C juures.Seejärel inokuleeriti terad umbes 5 ml värskest kultuurist pärit leotatud seeneniidistikugaB. cookeiLSLP18 isoleeritakse ja jäetakse 2 nädalaks toatemperatuurile, raputades kolbe iga 3 päeva järel.2 nädala pärast kuivatati seenega nakatunud sorgo terad õhu käes ja säilitati seejärel 4 ° C juures kuni põllu inokuleerimiseni.Sama inokulaadi kasutati kogu katse ajal ja seda tehti igal aastal värskeks.Inokuleerimiseks pandi 4-5 nädala vanuste sorgotaimede keerisesse 6–10 nakatunud tera.Nendest seentest toodetud eosed algatasid noorte sorgotaimede nakatumise nädala jooksul.
Seemnete ettevalmistamine
Enne põllule istutamist töödeldi sorgo seemet fungitsiidi, insektitsiidide ja taimekaitsevahendite seguga, mis sisaldas ~ 1% Spirato 480 FS fungitsiidi, 4% Sebring 480 FS fungitsiidi, 3% Sorpro 940 ES seemnekaitseainet.Seejärel kuivatati seemneid õhu käes 3 päeva, mis kattis seemnete ümber õhukese katte.Taimekaitseaine lubas tärkamiseelse ravina kasutada herbitsiidi Dual Magnum.
Sihtlehe täpikindluse hindamine
SCP istutati 14.–15. juunil 2017 ja 20. juunil 2018 Central Crops Research Stationis Claytonis, NC-s randomiseeritud täielikus plokkides, kus mõlemal juhul tehti kaks katset.Katsed istutati 1,8 m üksikutesse ridadesse 0,9 m rea laiusega, kasutades 10 seemet proovitüki kohta.Iga katse perifeeria ümber istutati kaks äärerida, et vältida servamõjusid.Katsed inokuleeriti 20. juulil 2017 ja 20. juulil 2018, mil sorgotaimed olid kasvufaasis 3. Hinnangud võeti skaalal üks kuni üheksa, kus haigustunnusteta taimed hinnati üheksa ja täielikult. surnud taimed hinnati üheks.2017. aastal tehti kaks hindamist ja 2018. aastal neli näitu, alustades igal aastal kaks nädalat pärast nakatamist.sAUDPC (standardiseeritud ala haiguse progresseerumiskõvera all) arvutati nii, nagu eelnevalt kirjeldatud.
Postitusaeg: aprill-01-2021