Sünteetiliste pestitsiidide laialdane kasutamine on toonud kaasa palju probleeme, sealhulgas resistentsete organismide teket, keskkonna halvenemist ja kahju inimeste tervisele.Seetõttu on kiiresti vaja uusi mikroobseid pestitsiide, mis on inimeste tervisele ja keskkonnale ohutud.Selles uuringus kasutati sääse (Culex quinquefasciatus) ja termiidi (Odontotermes obesus) vastsete toksilisuse hindamiseks Enterobacter cloacae SJ2 toodetud biosurfaktanti ramnolipiid.Tulemused näitasid, et ravikordade vahel oli annusest sõltuv suremus.Termiitide ja sääsevastsete biosurfaktantide LC50 (50% surmav kontsentratsioon) väärtus 48 tunni pärast määrati mittelineaarse regressioonikõvera sobitusmeetodi abil.Tulemused näitasid, et biosurfaktanti larvitsiidi ja termiidivastase aktiivsuse 48-tunnised LC50 väärtused (95% usaldusvahemik) olid vastavalt 26,49 mg/l (vahemikus 25,40 kuni 27,57) ja 33,43 mg/l (vahemikus 31,09 kuni 35,68).Histopatoloogilise uuringu kohaselt põhjustas ravi biosurfaktantidega vastsete ja termiitide organellide kudede tugevat kahjustust.Selle uuringu tulemused näitavad, et Enterobacter cloacae SJ2 toodetud mikroobne biosurfaktant on suurepärane ja potentsiaalselt tõhus vahend Cx kontrollimiseks.quinquefasciatus ja O. obesus.
Troopilistes maades esineb palju sääskede kaudu levivaid haigusi1.Sääskede kaudu levivate haiguste tähtsus on laialt levinud.Igal aastal sureb malaariasse üle 400 000 inimese ja mõnes suuremas linnas esinevad selliste tõsiste haiguste epideemiad nagu dengue, kollapalavik, chikungunya ja Zika.2 Vektori kaudu levivad haigused on seotud iga kuuenda nakkusega kogu maailmas, kusjuures kõige rohkem põhjustavad sääsed. olulised juhtumid3 ,4.Culex, Anopheles ja Aedes on kolm sääskede perekonda, mida kõige sagedamini seostatakse haiguste levikuga5.Aedes aegypti sääse levitatava nakkuse denguepalaviku levimus on viimase kümnendi jooksul suurenenud ja kujutab endast märkimisväärset ohtu rahvatervisele4,7,8.Maailma Terviseorganisatsiooni (WHO) andmetel on enam kui 40% maailma elanikkonnast denguepalaviku ohus ning enam kui 100 riigis esineb igal aastal 50–100 miljonit uut haigusjuhtu9, 10, 11.Denguepalavik on muutunud suureks rahvatervise probleemiks, kuna selle esinemissagedus on kogu maailmas suurenenud12,13,14.Anopheles gambiae, üldtuntud kui Aafrika Anopheles sääsk, on inimeste kõige olulisem malaaria vektor troopilistes ja subtroopilistes piirkondades15.Lääne-Niiluse viirust, St Louis entsefaliiti, Jaapani entsefaliiti ning hobuste ja lindude viirusnakkusi kannavad edasi Culexi sääsed, mida sageli nimetatakse tavalisteks majasääskedeks.Lisaks on nad ka bakteriaalsete ja parasiithaiguste kandjad16.Maailmas on rohkem kui 3000 termiitide liiki ja nad on eksisteerinud enam kui 150 miljonit aastat17.Enamik kahjureid elab pinnases ning toitub puidust ja tselluloosi sisaldavatest puittoodetest.India termiit Odontotermes obesus on oluline kahjur, mis põhjustab tõsist kahju olulistele põllukultuuridele ja istandikutele18.Põllumajanduspiirkondades võivad termiitidega nakatumised erinevatel etappidel põhjustada tohutut majanduslikku kahju erinevatele põllukultuuridele, puuliikidele ja ehitusmaterjalidele.Termiidid võivad põhjustada ka inimeste terviseprobleeme19.
Mikroorganismide ja kahjurite resistentsuse küsimus tänapäeva farmaatsia- ja põllumajandusvaldkondades on keeruline20,21.Seetõttu peaksid mõlemad ettevõtted otsima uusi kulutõhusaid antimikroobseid aineid ja ohutuid biopestitsiide.Nüüd on saadaval sünteetilised pestitsiidid, mis on osutunud nakkavateks ja tõrjuvad mittesihtotstarbelisi kasulikke putukaid22.Viimastel aastatel on biopindaktiivsete ainete uuringud laienenud tänu nende rakendamisele erinevates tööstusharudes.Biopindaktiivsed ained on väga kasulikud ja elutähtsad põllumajanduses, mulla tervendamisel, nafta ekstraheerimisel, bakterite ja putukate eemaldamisel ning toiduainete töötlemisel23,24.Biopindaktiivsed ained ehk mikroobsed pindaktiivsed ained on biopindaktiivsed kemikaalid, mida toodavad mikroorganismid, nagu bakterid, pärmid ja seened rannikuäärsetes elupaikades ja õliga saastunud aladel25,26.Keemiliselt saadud pindaktiivsed ained ja biopindaktiivsed ained on kahte tüüpi, mida saadakse otse looduskeskkonnast27.Erinevaid biopindaktiivseid aineid saadakse mereelupaikadest28,29.Seetõttu otsivad teadlased uusi tehnoloogiaid looduslikel bakteritel põhinevate biopindaktiivsete ainete tootmiseks30,31.Selliste uuringute edusammud näitavad nende bioloogiliste ühendite tähtsust keskkonnakaitses32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium ja need bakteriperekonnad on hästi uuritud esindajad23,33.
Biopindaktiivseid aineid on mitut tüüpi, millel on lai kasutusala34.Nende ühendite oluline eelis on see, et mõnel neist on antibakteriaalne, larvitsiidne ja insektitsiidne toime.See tähendab, et neid saab kasutada põllumajandus-, keemia-, farmaatsia- ja kosmeetikatööstuses35,36,37,38.Kuna biopindaktiivsed ained on üldiselt biolagunevad ja keskkonnale kasulikud, kasutatakse neid integreeritud kahjuritõrjeprogrammides põllukultuuride kaitsmiseks39.Seega on saadud põhiteadmised Enterobacter cloacae SJ2 poolt toodetud mikroobsete biosurfaktantide larvitsiidi ja termiidivastase toime kohta.Uurisime suremust ja histoloogilisi muutusi ramnolipiidsete biosurfaktantide erinevate kontsentratsioonidega kokkupuutel.Lisaks hindasime laialdaselt kasutatavat kvantitatiivse struktuuri-aktiivsuse (QSAR) arvutiprogrammi Ecological Structure-Activity (ECOSAR), et määrata mikrovetikate, dafnia ja kalade äge toksilisus.
Selles uuringus testiti puhastatud biosurfaktantide termiidivastast toimet (toksilisust) erinevates kontsentratsioonides vahemikus 30 kuni 50 mg/ml (5 mg/ml intervalliga) India termiitide, O. obesuse ja neljanda liigi suhtes. Hinnake.Instar Cx vastsed.Sääskede vastsed quinquefasciatus.Biosurfaktant LC50 kontsentratsioonid 48 tunni jooksul O. obesuse ja Cx vastu.C. solanacearum.Sääsevastsed tuvastati mittelineaarse regressioonikõvera sobitusmeetodi abil.Tulemused näitasid, et termiitide suremus suurenes biosurfaktantide kontsentratsiooni suurenedes.Tulemused näitasid, et biosurfaktandil oli larvitsiidne (joonis 1) ja termiidivastane toime (joonis 2), 48 tunni LC50 väärtused (95% CI) olid 26,49 mg/l (25,40 kuni 27,57) ja 33,43 mg/l. l (joonis 31.09 kuni 35.68) vastavalt (tabel 1).Ägeda toksilisuse (48 tundi) osas on biosurfaktant klassifitseeritud testitud organismidele kahjulikuks.Selles uuringus toodetud biosurfaktant näitas suurepärast larvitsiidi aktiivsust 100% suremusega 24–48 tunni jooksul pärast kokkupuudet.
Arvutage larvitsiidi aktiivsuse LC50 väärtus.Mittelineaarse regressioonikõvera sobitamine (pidev joon) ja 95% usaldusvahemik (varjutatud ala) suhtelise suremuse (%) jaoks.
Arvutage termiidivastase aktiivsuse LC50 väärtus.Mittelineaarse regressioonikõvera sobitamine (pidev joon) ja 95% usaldusvahemik (varjutatud ala) suhtelise suremuse (%) jaoks.
Katse lõpus täheldati mikroskoobi all morfoloogilisi muutusi ja anomaaliaid.Morfoloogilisi muutusi täheldati kontroll- ja ravirühmades 40-kordse suurendusega.Nagu on näidatud joonisel fig 3, tekkis enamikul biosurfaktantidega töödeldud vastsetel kasvuhäire.Joonisel 3a on näidatud normaalne Cx.quinquefasciatus, joonisel fig 3b on näidatud anomaalne Cx.Põhjustab viis nematoodi vastset.
Biosurfaktantide subletaalsete (LC50) annuste mõju Culex quinquefasciatus vastsete arengule.Valgusmikroskoopia pilt (a) tavalisest Cx-st 40-kordse suurendusega.quinquefasciatus (b) Ebanormaalne Cx.Põhjustab viis nematoodi vastset.
Käesolevas uuringus näitas töödeldud vastsete (joonis 4) ja termiitide (joonis 5) histoloogiline uurimine mitmeid kõrvalekaldeid, sealhulgas kõhupiirkonna vähenemist ning lihaste, epiteelikihtide ja naha kahjustusi.kesksool.Histoloogia näitas selles uuringus kasutatud biopindaktiivse aine inhibeeriva toime mehhanismi.
Normaalsete ravimata 4. staadiumis Cx vastsete histopatoloogia.quinquefasciatus vastsed (kontroll: (a, b)) ja töödeldud biosurfaktandiga (ravi: (c, d)).Nooled näitavad töödeldud sooleepiteeli (epi), tuumasid (n) ja lihaseid (mu).Varras = 50 µm.
Normaalse töötlemata O. obesuse (kontroll: (a, b)) ja biosurfaktantidega töödeldud (ravi: (c, d)) histopatoloogia.Nooled näitavad vastavalt sooleepiteeli (epi) ja lihaseid (mu).Varras = 50 µm.
Selles uuringus kasutati ECOSAR-i, et ennustada ramnolipiidsete biosurfaktantide toodete ägedat toksilisust esmatootjatele (rohevetikad), esmatarbijatele (vesikirbud) ja teisestele tarbijatele (kalad).See programm kasutab molekulaarstruktuuril põhineva toksilisuse hindamiseks keerukaid kvantitatiivseid struktuuri-aktiivsuse ühendimudeleid.Mudel kasutab struktuuriaktiivsuse (SAR) tarkvara, et arvutada ainete akuutne ja pikaajaline toksilisus veeliikidele.Täpsemalt on tabelis 2 kokkuvõte mitme liigi hinnangulised keskmised surmavad kontsentratsioonid (LC50) ja keskmised efektiivsed kontsentratsioonid (EC50).Arvatav toksilisus liigitati ülemaailmselt harmoneeritud kemikaalide klassifitseerimise ja märgistamise süsteemi abil nelja tasemesse (tabel 3).
Vektori kaudu levivate haiguste, eriti sääskede ja Aedes sääskede tüvede tõrje.Egiptlased, nüüd raske töö 40,41,42,43,44,45,46.Kuigi mõned keemiliselt kättesaadavad pestitsiidid, nagu püretroidid ja orgaanilised fosfaadid, on mõnevõrra kasulikud, kujutavad need endast märkimisväärset ohtu inimeste tervisele, sealhulgas diabeedile, reproduktiivhäiretele, neuroloogilistele häiretele, vähile ja hingamisteede haigustele.Pealegi võivad need putukad aja jooksul muutuda nende suhtes resistentseks13,43,48.Seega muutuvad tõhusad ja keskkonnasõbralikud bioloogilised tõrjemeetmed populaarsemaks sääsetõrjemeetodiks49,50.Benelli51 väitis, et sääsevektorite varajane tõrje oleks linnapiirkondades tõhusam, kuid nad ei soovitanud maapiirkondades kasutada larvitsiidi52.Tom jt 53 väitsid ka, et sääskede tõrje nende ebaküpses staadiumis oleks ohutu ja lihtne strateegia, kuna nad on tõrjevahendite suhtes tundlikumad 54 .
Tugeva tüve (Enterobacter cloacae SJ2) biosurfaktantide tootmine näitas järjekindlat ja paljutõotavat efektiivsust.Meie eelmine uuring teatas, et Enterobacter cloacae SJ2 optimeerib biosurfaktantide tootmist füüsikalis-keemiliste parameetrite abil .Nende uuringu kohaselt olid potentsiaalse E. cloacae isolaadi poolt biopindaktiivse aine tootmiseks optimaalsed tingimused inkubeerimine 36 tundi, segamine kiirusel 150 p/min, pH 7,5, 37 °C, soolsus 1 ppt, süsinikuallikana 2% glükoosi, 1% pärmi. .ekstrakti kasutati lämmastikuallikana, et saada 2,61 g/l biopindaktiivset ainet.Lisaks iseloomustati biopindaktiivseid aineid TLC, FTIR ja MALDI-TOF-MS abil.See kinnitas, et ramnolipiid on biopindaktiivne aine.Glükolipiidsed biopindaktiivsed ained on teist tüüpi biopindaktiivsete ainete kõige intensiivsemalt uuritud klass55.Need koosnevad süsivesikute ja lipiidide osadest, peamiselt rasvhappeahelatest.Glükolipiididest on peamised esindajad ramnolipiid ja soforolipiid56.Ramnolipiidid sisaldavad kahte ramnoosiosa, mis on seotud mono- või di-β-hüdroksüdekaanhappega 57 .Ramnolipiidide kasutamine meditsiini- ja farmaatsiatööstuses on hästi välja kujunenud 58 , lisaks nende hiljutisele kasutamisele pestitsiididena 59 .
Biopindaktiivse aine koostoime respiratoorse sifooni hüdrofoobse piirkonnaga võimaldab vett läbi selle stomataalse õõnsuse, suurendades seeläbi vastsete kokkupuudet veekeskkonnaga.Biosurfaktantide olemasolu mõjutab ka hingetoru, mille pikkus on pinnalähedane, mistõttu on vastsetel lihtsam pinnale roomata ja hingata.Selle tulemusena väheneb vee pindpinevus.Kuna vastsed ei saa kinnituda veepinnale, langevad nad paagi põhja, häirides hüdrostaatilise rõhu tõttu, mille tagajärjeks on ülemäärane energiakulu ja hukkumine uppumise tagajärjel38,60.Sarnased tulemused saadi Ghribi61-ga, kus Bacillus subtilis'e toodetud biosurfaktant avaldas Ephestia kuehniella vastsetevastast toimet.Samamoodi on Cx larvitsiidi aktiivsus.Das ja Mukherjee23 hindasid ka tsükliliste lipopeptiidide mõju quinquefasciatuse vastsetele.
Selle uuringu tulemused puudutavad ramnolipiidsete biopindaktiivsete ainete larvitsiidilist toimet Cx suhtes.Quinquefasciatus sääskede tapmine on kooskõlas varem avaldatud tulemustega.Näiteks kasutatakse surfaktiinipõhiseid biopindaktiivseid aineid, mida toodavad mitmesugused perekonna Bacillus bakterid.ja Pseudomonas spp.Mõned varased aruanded64, 65, 66 teatasid Bacillus subtilis'e lipopeptiidide biosurfaktantide vastseid tapvast toimest23.Deepali jt.63 leidis, et Stenotropomonas maltophiliast eraldatud ramnolipiidse biosurfaktandil oli tugev larvitsiidi toime kontsentratsioonis 10 mg/l.Silva jt.67 teatas ramnolipiidse biosurfaktanti larvitsiidist toimest Ae suhtes kontsentratsioonil 1 g/l.Aedes aegypti.Kanakdande jt.68 teatas, et Bacillus subtilis'e toodetud lipopeptiidsed biopindaktiivsed ained põhjustasid eukalüpti lipofiilse fraktsiooniga Culexi vastsete ja termiitide üldise suremuse.Samamoodi on Masendra et al.69 teatas töösipelgate (Cryptotermes cynocephalus Light.) suremuseks 61,7% E. toorekstrakti lipofiilses n-heksaani ja EtOAc fraktsioonis.
Parthipan jt 70 teatasid Bacillus subtilis A1 ja Pseudomonas stutzeri NA3 toodetud lipopeptiidsete biosurfaktantide insektitsiidsest kasutamisest malaariaparasiidi Plasmodium vektori Anopheles Stephensi vastu.Nad täheldasid, et vastsed ja nukud jäid ellu kauem, neil oli lühem munemisperiood, steriilsed ja lühem eluiga, kui neid raviti erineva kontsentratsiooniga biopindaktiivsete ainetega.B. subtilis'e biosurfaktant A1 täheldatud LC50 väärtused olid vastavalt 3,58, 4,92, 5,37, 7,10 ja 7,99 mg/l vastsete erinevate seisundite (st vastsed I, II, III, IV ja staadiumi nukud) puhul.Võrdluseks, Pseudomonas stutzeri NA3 vastsete I-IV staadiumis ja nukufaasis olid biosurfaktantid vastavalt 2,61, 3,68, 4,48, 5,55 ja 6,99 mg/l.Arvatakse, et ellujäänud vastsete ja nukkude hiline fenoloogia on insektitsiididega töötlemisest põhjustatud oluliste füsioloogiliste ja metaboolsete häirete tagajärg71.
Wickerhamomyces anomalus tüvi CCMA 0358 toodab biosurfaktanti, millel on 100% larvitsiidne toime Aedes sääskede vastu.aegypti 24-tunnine intervall 38 oli kõrgem kui Silva et al.On näidatud, et Pseudomonas aeruginosast toodetud biopindaktiivne aine, kasutades süsinikuallikana päevalilleõli, tapab 100% vastsetest 48 tunni jooksul 67 .Abinaya jt 72 ja Pradhan jt 73 näitasid ka mitmete perekonna Bacillus isolaatide poolt toodetud pindaktiivsete ainete larvitsiidi või insektitsiidset toimet.Senthil-Nathani jt varem avaldatud uuring.leidis, et 100% taimede laguunidega kokku puutunud sääsevastsetest sureb tõenäoliselt.74.
Insektitsiidide subletaalse mõju hindamine putukate bioloogiale on integreeritud kahjuritõrjeprogrammide jaoks kriitilise tähtsusega, kuna subletaalsed annused/kontsentratsioonid ei tapa putukaid, kuid võivad bioloogilisi omadusi häirides vähendada putukate populatsioone tulevastes põlvkondades10.Siqueira jt 75 täheldasid ramnolipiidse biosurfaktanti (300 mg/ml) täielikku larvitsiidi aktiivsust (100% suremus), kui testiti erinevatel kontsentratsioonidel vahemikus 50 kuni 300 mg/ml.Aedes aegypti tüvede vastsete staadium.Nad analüüsisid surmani kuluva aja ja subletaalse kontsentratsiooni mõju vastsete ellujäämisele ja ujumisaktiivsusele.Lisaks täheldasid nad ujumiskiiruse vähenemist pärast 24–48-tunnist kokkupuudet biosurfaktantide subletaalsete kontsentratsioonidega (nt 50 mg/ml ja 100 mg/ml).Arvatakse, et mürgid, millel on paljutõotav subletaalne roll, on tõhusamad paljastatud kahjuritele mitmekordse kahju tekitamisel76.
Meie tulemuste histoloogilised vaatlused näitavad, et Enterobacter cloacae SJ2 toodetud biopindaktiivsed ained muudavad oluliselt sääse (Cx. quinquefasciatus) ja termiidi (O. obesus) vastsete kudesid.Sarnaseid kõrvalekaldeid põhjustasid basiilikuõli preparaadid An.gambiaes.s ja An.arabicat kirjeldas Ochola77.Kamaraj et al.78 kirjeldasid samu morfoloogilisi kõrvalekaldeid ka An.Stephanie vastsed puutusid kokku kulla nanoosakestega.Vasantha-Srinivasan jt 79 teatasid ka, et lambakoti eeterlik õli kahjustas tõsiselt Aedes albopictus'e kambrit ja epiteeli kihte.Aedes aegypti.Raghavendran jt teatasid, et sääsevastseid töödeldi kohaliku Penicillium seene mütseeli ekstraktiga 500 mg / ml.Ae näitavad tõsist histoloogilist kahjustust.aegypti ja Cx.Suremus 80. Varem Abinaya et al.Uuriti An neljanda järgu vastseid.Stephensi ja Ae.aegypti leidis B. licheniformis eksopolüsahhariididega töödeldud Aedes aegyptis arvukalt histoloogilisi muutusi, sealhulgas mao pimesoole, lihaste atroofiat, närvijuhtme ganglionide kahjustusi ja disorganiseerumist72.Raghavendrani jt andmetel ilmnes pärast P. daleae mütseeliekstraktiga töötlemist testitud sääskede (4. järgu vastsed) kesksoolerakkudel soole valendiku turse, rakkudevahelise sisu vähenemine ja tuumadegeneratsioon81.Echinacea lehtede ekstraktiga töödeldud sääsevastsete puhul täheldati samu histoloogilisi muutusi, mis näitavad töödeldud ühendite insektitsiidset potentsiaali50.
ECOSARi tarkvara kasutamine on pälvinud rahvusvahelist tunnustust82.Praegused uuringud näitavad, et ECOSARi biosurfaktantide äge toksilisus mikrovetikatele (C. vulgaris), kaladele ja vesikirpudele (D. magna) kuulub ÜRO määratletud mürgisuse kategooriasse83.ECOSARi ökotoksilisuse mudel kasutab SAR-i ja QSAR-i ainete ägeda ja pikaajalise toksilisuse ennustamiseks ning seda kasutatakse sageli orgaaniliste saasteainete toksilisuse ennustamiseks82,84.
Paraformaldehüüd, naatriumfosfaatpuhver (pH 7,4) ja kõik muud selles uuringus kasutatud kemikaalid osteti ettevõttest HiMedia Laboratories, India.
Biopindaktiivse aine tootmine viidi läbi 500 ml Erlenmeyeri kolbides, mis sisaldasid 200 ml steriilset Bushnell Haas söödet, millele oli ainsa süsinikuallikana lisatud 1% toorõli.Enterobacter cloacae SJ2 eelkultuur (1,4 × 104 CFU/ml) inokuleeriti ja kultiveeriti orbitaalloksutil temperatuuril 37 °C, 200 pööret minutis 7 päeva.Pärast inkubatsiooniperioodi ekstraheeriti biosurfaktant, tsentrifuugides söödet kiirusel 3400 x g 20 minutit temperatuuril 4 °C ja saadud supernatanti kasutati sõelumiseks.Biosurfaktantide optimeerimisprotseduurid ja iseloomustus võeti vastu meie varasemast uuringust26.
Culex quinquefasciatus'e vastsed saadi merebioloogia arenenud uuringute keskusest (CAS), Palanchipetai, Tamil Nadu (India).Vastseid kasvatati plastmahutites, mis olid täidetud deioniseeritud veega temperatuuril 27 ± 2 °C ja fotoperioodi 12:12 (hele:tume) juures.Sääsevastseid toideti 10% glükoosilahusega.
Culex quinquefasciatus'e vastseid on leitud avatud ja kaitsmata septikutest.Kasutage vastsete laboris tuvastamiseks ja kultiveerimiseks standardseid klassifitseerimisjuhiseid85.Larvitsiidikatsed viidi läbi vastavalt Maailma Terviseorganisatsiooni soovitustele 86 .SH.Quinquefasciatuse neljanda kasvujärgu vastsed koguti suletud tuubidesse 25 ml ja 50 ml rühmadena, mille õhupilu oli kaks kolmandikku nende mahutavusest.Igasse tuubi lisati eraldi biosurfaktant (0–50 mg/ml) ja säilitati temperatuuril 25 °C.Kontrolltuubis kasutati ainult destilleeritud vett (50 ml).Surnud vastseteks loeti neid, mis inkubatsiooniperioodil (12–48 tundi) ei näidanud ujumise märke 87 .Arvutage võrrandi abil vastsete suremuse protsent.(1)88.
Perekonda Odontotermitidae kuulub India termiit Odontotermes obesus, keda leidub põllumajanduslinnaku (Annamalai ülikool, India) mädanenud palkidest.Testige seda biopindaktiivset ainet (0–50 mg/ml) tavapäraste protseduuride abil, et teha kindlaks, kas see on kahjulik.Pärast laminaarses õhuvoolus 30-minutilist kuivatamist kaeti iga Whatmani paberi riba biopindaktiivse ainega kontsentratsioonis 30, 40 või 50 mg/ml.Eelnevalt kaetud ja katmata paberiribasid testiti ja võrreldi Petri tassi keskel.Igas Petri tassis on umbes kolmkümmend aktiivset termiiti O. obesus.Kontroll- ja katsetermiitidele anti toiduallikana märg paber.Kõiki plaate hoiti kogu inkubatsiooniperioodi vältel toatemperatuuril.Termiidid surid pärast 12, 24, 36 ja 48 tundi89,90.Seejärel kasutati võrrandit 1 termiitide suremuse protsendi hindamiseks erinevate biosurfaktantide kontsentratsioonide korral.(2).
Proove hoiti jääl ja pakiti mikrotuubidesse, mis sisaldasid 100 ml 0,1 M naatriumfosfaatpuhvrit (pH 7,4) ja saadeti Rajiv Gandhi vesiviljeluse keskuse (RGCA) vesiviljeluse patoloogia kesklaboratooriumi (CAPL).Histoloogialabor, Sirkali, Mayiladuthurai.Piirkond, Tamil Nadu, India edasiseks analüüsiks.Proovid fikseeriti kohe 4% paraformaldehüüdis 37 °C juures 48 tundi.
Pärast fikseerimisfaasi pesti materjali kolm korda 0,1 M naatriumfosfaatpuhvriga (pH 7,4), dehüdreeriti järk-järgult etanoolis ja leotati LEICA vaigus 7 päeva.Seejärel asetatakse aine vaigu ja polümerisaatoriga täidetud plastvormi ning seejärel 37°C-ni kuumutatud ahju, kuni ainet sisaldav plokk on täielikult polümeriseerunud.
Pärast polümerisatsiooni lõigati plokid LEICA RM2235 mikrotoomiga (Rankin Biomedical Corporation 10 399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48 350, USA) 3 mm paksuseks.Sektsioonid on rühmitatud slaididele, kuus osa slaidi kohta.Slaidid kuivatati toatemperatuuril, seejärel värviti hematoksüliiniga 7 minutit ja pesti voolava veega 4 minutit.Lisaks kandke eosiinilahust nahale 5 minutiks ja loputage jooksva veega 5 minutit.
Ägeda mürgisuse ennustamiseks kasutati erinevate troopiliste tasemete veeorganisme: 96-tunnine kala LC50, 48-tunnine D. magna LC50 ja 96-tunnine rohevetika EC50.Ramnolipiidsete biopindaktiivsete ainete toksilisust kaladele ja rohevetikatele hinnati, kasutades ECOSARi tarkvara versiooni 2.2 for Windows, mille on välja töötanud USA Keskkonnakaitseagentuur.(Saadaval veebis aadressil https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model).
Kõik larvitsiidi ja termiidivastase toime testid viidi läbi kolmes eksemplaris.Viidi läbi vastsete ja termiitide suremuse andmete mittelineaarne regressioon (doosi-vastuse muutujate log), et arvutada keskmine surmav kontsentratsioon (LC50) 95% usaldusvahemikuga ja kontsentratsiooni vastuse kõverad genereeriti Prism® (versioon 8.0, GraphPad Software) Inc. abil. USA) 84, 91.
Käesolev uuring paljastab Enterobacter cloacae SJ2 toodetud mikroobsete biosurfaktantide potentsiaali sääsevastsete ja termiidivastaste ainetena ning see töö aitab paremini mõista larvitsiidi ja termiidivastase toime mehhanisme.Biosurfaktantidega töödeldud vastsete histoloogilised uuringud näitasid seedetrakti, kesksoole, ajukoore kahjustusi ja sooleepiteelirakkude hüperplaasiat.Tulemused: Enterobacter cloacae SJ2 toodetud ramnolipiidse biosurfaktanti termiidivastase ja larvitsiidi aktiivsuse toksikoloogiline hindamine näitas, et see isolaat on potentsiaalne biopestitsiid sääskede (Cx quinquefasciatus) ja termiitide (O. obesus) vektori kaudu levivate haiguste tõrjeks.On vaja mõista biopindaktiivsete ainete aluseks olevat keskkonnatoksilisust ja nende võimalikku keskkonnamõju.See uuring annab teadusliku aluse biosurfaktantide keskkonnariski hindamiseks.
Postitusaeg: aprill-09-2024